TRANSFERENCIA DE EMBRIONES (RECOLECTA, EVALUACION Y CONGELACION DE EMBRIONES). parte 3: EMPAJILLADO DEL EMBRION Y CONGELACION EN LA T.I.

3. EMPAJILLADO DEL EMBRION Y CONGELACION

• EMPAJILLADO DEL EMBRION

Para ello vamos a utilizar una jeringa de insulina y una punta de pipeta. Ponemos la pajilla esteril dentro de la punta de pipeta y con la jeringa aspiramos una columna de medio enriquecido (HOLDING), luego una columna de aire, nuevamente una columna de medio y una columna de aire.

Teniendo dos columnas de medio y dos columnas de aire aspiramos el embrion con su respectivo medio (HOLDING o EG) y repetimos el procedimiento anterior y por ultimo le colocamos el plugs,

Una vez empajillados los embriones hacemos uso de la congeladora.

NOTA: Después de sumergir los embriones en el etilenglicol se recomienda no exceder un tiempo de cinco (5) minutos, para su respectiva congelación.

•  CONGELACION

Para lo cual requerimos del FREZZER CONTROL.

- Encendemos el switch posterior y Chequear la carga de la batería  (tes button).

- Levantar la crio cámara y deposite 5cm de nitrógeno.

- Conectarla crio cámara  en el toque posterior.

- Coloque el control de temperatura en HOLD.

-    Seleccionar la curva de congelación: Depende  del manual  del frezze y del medio de congelación  etilenglicol o glicerol, la más recomendada en esta ocasión la curva de congelación numero 2, esta curva me determina la relación del descenso de los grados  con respecto al tiempo.

- Encienda el equipo (Switch frontal).

- Colocar la tapa de la crio cámara.

- Llenar de nitrógeno completamente.

- Oprimir Reset (la temperatura baja  a -6°C), para eliminar alguna programación anterior

- Colocar las pajillas en la cámara.

- Se realiza el SEEDING:  Con un hisopo de algodón aplicamos un poco de nitrógeno líquido en las puntas de la pajilla. Esto evita que al congelar la pajilla se formen cristales que dañen el embrión.

- Se oprime el botón RUN, se verifica el nitrógeno y tapar.

- Luego de esto procedemos al congelamiento gradual de los embriones primero a -6°C; luego a -32°C y por último a -196°C.

Hay que tener presente que los embriones congelados deben ir siempre en las canastillas de abajo e inmersos en nitrógeno.

Se guardan en los termos almacenadores en su respectiva canastilla o goblest bien identificado